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          meilunbio雙酶報告基因試劑盒橫空出世!取代進口填補國內空白,只為真正懂你的人而生!
          2019-12-04  來源:美侖生物

           

           

           

           

           

           

          填補國內空白
          meilunbio雙酶報告基因試劑盒

           

           

           

           

           

           

           

          產品簡介:
          報告基因系統廣泛應用于真核生物基因表達和細胞生理學研究,包括受體活性、轉錄因子、細胞信號轉導、mRNA加工和蛋白質折疊等。“雙報告基因”通常被用來提高實驗精確度,即在一個系統中同時表達和測量兩個獨立的報告基因。一般來說,實驗組報告基因與具體實驗條件的影響是相關的,而共同轉染的內對照組報告基因則是用來充當校正參數,作為內參提供反應基線。將實驗組的結果與內對照組的結果進行約化處理,可降低由細胞存活率或轉染效率的差異而導致的結果波動,同時還可消除由取樣體積、細胞裂解效率和儀器測定引起的實驗誤差。因此,雙報告基因檢測可以通過減少外部影響來獲得更可靠的實驗數據。
          美侖雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒(Firefly & Renilla Luciferase Reporter Assay Kit)提供了一種有效的雙報告基因檢測方法,在同一個樣品中先以螢光素(Luciferin)為底物來檢測螢火蟲螢光素酶(Firefly luciferase),后以腔腸素(Coelenterazine)為底物來檢測海腎螢光素酶(Renilla luciferase),同時淬滅Firefly luciferase的螢光信號,實現雙螢光素酶報告基因檢測。該試劑盒可靈敏高效的檢測受基因元件調控的Luciferase表達,通常將轉錄調控元件或5'啟動子區克隆在Firefly luciferase的上游,或把3'-UTR區克隆在Firefly luciferase的下游,構建成報告基因(reporter gene)質粒。將報告基因質粒(Firefly)和內參質粒(Renilla)共轉染細胞,經給藥刺激等操作完畢后,裂解細胞并測定螢光素酶活性。通過螢光素酶活性的高低來判斷藥物處理對目的基因的轉錄調控作用。Renilla luciferase作為校正轉染效率的內參可以消除細胞數量和轉染效率的差異。螢火蟲螢光素酶催化Luciferin發光的最強發光波長為560nm。海腎螢光素酶催化Coelenterazine發光的最強發光波長為465nm,具體波段選用需依據實驗需求和所用儀器進行設定,通常采用全波段接收發射信號即可,不必單獨設置。
          反應原理如下:

           

           

          數據展示


           

           

          圖1. 螢火蟲螢光素酶發光強度、淬滅效果以及海腎螢光素酶發光強度對比。由圖可知,各組間Firefly luciferase/ Renilla luciferase濃度和比例相同的前提下,美侖組的發光強度高于國產品牌。更為重要的是,美侖組的Firefly luciferase 淬滅效果最佳,遠超國內其他品牌,熒光殘留量僅為0.001%!幾乎完全不影響Renilla再發光,因而具有最高的Renilla 信噪比,使得測試結果更加準確,數據可重復性提高!而其他國產試劑Firefly螢光淬滅很差,背景很高,直接影響Renilla讀值。(儀器:BioTek HTX)

           

           

           

          圖2. 美侖Firefly luciferase螢光信號穩定性(動力學)檢測。從反應初始時刻持續追蹤Firefly luciferase螢光信號30s,可以發現美侖組的螢光信號近乎無衰減,信號穩定性極好,遠遠滿足常規機器操作所需時長?。▋x器參數:VILBER/化學發光/-90制冷CCD)


           

           

          圖3. 美侖組Luminescence-Firefly luciferase濃度梯度標準曲線。在儀器(BioTek HTX)允許的最大測試范圍內,美侖Firefly luciferase 螢光線性檢測范圍可達8個數量級,R2可達0.9996?。▋x器:BioTek HTX)

           

           

           

          TNFa

          20ng/ml

          10ng/ml

          5ng/ml

          2ng/ml

          0ng/ml

          Firefly:Lum

          1835882

          952348

          193674

          44991

          43038

          Renilla:Lum

          21336

          29067

          24360

          25063

          26178

          Firefly/Renilla ratio

          86.046

          32.763

          7.950

          1.795

          1.644

          Firefly/Renilla normalized

          52.336

          19.928

          4.835

          1.091

          1.000

           

          圖4. 美侖雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒實際應用舉例。HEK-293T細胞共轉染了螢火蟲螢光素酶NF-κB response reporter 和海腎螢光素酶內參質粒。轉染后12h,進行TNFα濃度梯度誘導,5h后收集細胞并進行裂解。酶標儀檢測雙酶的信號讀值,對數據進行約化和歸一化處理,詳見表格。上圖為Firefly/Renilla約化數據折線圖,可以明顯看出Firefly/Renilla ratio 與給藥濃度呈正相關,符合預期,并且梯度間變化顯著,提示美侖雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒靈敏度高?。▋x器:BioTek HTX)

           

           

           

           

           

           

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